HEK293細胞系家族歷史概覽
1973年，科學(xué)家從一個(gè)父母譜系不祥的人類(lèi)流產(chǎn)胚胎的腎臟中分離出最原始的人胚腎細胞，即293細胞（human embryonic kidney (HEK) 293 cell line），該細胞被轉入修改后的5型腺病毒DNA片段，一開(kāi)始轉化非常困難，一直到幾個(gè)月后，科學(xué)家得到一個(gè)穩定的可以快速生長(cháng)的293單克隆細胞株，自此HEK293誕生。HEK293細胞在細胞生物學(xué)和生物技術(shù)中的應用頻率僅次于第一個(gè)人類(lèi)細胞系HeLa，并衍生出數百種克隆細胞系。SV40 large T抗原穩轉入HEK293細胞而得到HEK293T；將HEK293馴化成能夠懸浮培養并且能夠耐受低鈣離子培養條件而獲得293S；而293F細胞是一類(lèi)能夠在無(wú)血清中高表達蛋白的野生型293細胞系。HEK293家族如此龐大，成員的特點(diǎn)和應用也大不相同：293T細胞-瞬時(shí)轉染，蛋白表達；293H/A細胞-噬菌斑或空斑實(shí)驗；293E細胞-重組蛋白的生產(chǎn)；293F細胞-慢病毒的生產(chǎn)和293S細胞-糖基化蛋白的表達。小優(yōu)今天主要給大家介紹的是HEK293和HEK293T的細胞特性以及如何培養。細胞培養的基本操作，大家可以參考《從零開(kāi)始-細胞培養入門(mén)指南》
 

圖1 HEK293細胞系家族歷史概覽

HEK293細胞培養攻略
細胞特點(diǎn)：
HEK293細胞既可以貼壁培養也可以懸浮培養，細胞在貼壁生長(cháng)時(shí)可能呈扁平狀，懸浮生長(cháng)時(shí)則呈圓形。但多數情況下，這類(lèi)細胞采用貼壁的方式進(jìn)行單層培養。HEK293細胞適應酸性環(huán)境，pH值在6.9～7.1時(shí)可順利貼壁生長(cháng)。HEK293細胞的另一生長(cháng)特性是貼壁所需時(shí)間長(cháng)且貼壁不牢。其在無(wú)Ca2+或含Ca2+培養基中可同樣生長(cháng)，也可生長(cháng)在血清濃度降低的培養基中，另外，HEK293細胞培養基通常為高葡萄糖細胞培養基。HEK293細胞可用于慢病毒包裝生產(chǎn)及滴度測定，細胞轉染，蛋白表達驗證等試驗。

培養條件（來(lái)自ATCC和中國科學(xué)院細胞庫/干細胞庫）：
溫度：37℃
CO2：5%
完quan培養基配方：Eagle's Minimum Essential Medium（EMEM）+10%胎牛血清（ATCC）；
或DMEM培養基+10%胎牛血清（中國科學(xué)院細胞庫/干細胞庫）
細胞形態(tài)：上皮樣，貼壁生長(cháng)
傳代比例：細胞融合率達到80-90%即可傳代，1:6-1:10。購買(mǎi)后的初次傳代建議1:2。
換液頻率：2-3天
傳代周期：每周
凍存液配方：細胞完quan培養液+含5%/8%DMSO（v/v）或商品化凍存液

 圖2：貼壁生長(cháng)的HEK293低密度和高密度時(shí)的細胞照片（來(lái)自ATCC）

文中部分相關(guān)產(chǎn)品：

HEK293T細胞細胞培養攻略
細胞特點(diǎn)：
由HEK293細胞衍生而來(lái)，是SV40 large T抗原穩轉得到的細胞株，貼壁不牢。293T細胞容易轉染，用磷酸鈣、PEI或脂質(zhì)體轉染，效率均可達90%以上。293T細胞除了可用于各類(lèi)基因表達及蛋白生產(chǎn)，還可用于高滴度逆轉錄病毒及其他病毒生產(chǎn)，如腺病毒及其他哺乳動(dòng)物病毒。需要注意的是，由于SV40大T抗原的存在，該細胞對G418耐藥，因此在使用該細胞進(jìn)行試驗的時(shí)候應避免使用G418作為抗性基因篩選。

培養條件（來(lái)自ATCC和中國科學(xué)院細胞庫/干細胞庫）：
溫度：37℃
CO2：5%
完quan培養基配方：DMEM+10%熱滅活胎牛血清+2mM L-glutamine（來(lái)自ATCC）；或DMEM+10%胎牛血清+1%Glutamax+1% 100 mM丙酮酸鈉溶液（來(lái)自中國科學(xué)院細胞庫/干細胞庫）。注意：該細胞貼壁能力較弱，培養時(shí)可酌情使用預鋪0.2%明膠的培養瓶/培養皿。
細胞形態(tài)：上皮樣，貼壁生長(cháng)
傳代比例：細胞融合率達到80%即可傳代，細胞生長(cháng)不能過(guò)密，過(guò)密細胞容易脫落。傳代比例1:3-1:8。注意：細胞傳代過(guò)程中一定要注意吹散細胞，接種密度不要過(guò)高，否則接種后細胞聚團將很難再吹散，會(huì )形成類(lèi)似球狀的聚集體貼壁生長(cháng)，培養條件合適的情況下細胞會(huì )逐漸攤開(kāi)生長(cháng)，但若培養條件無(wú)法有效促進(jìn)細胞貼壁，可能會(huì )長(cháng)時(shí)間呈球狀增殖。
換液頻率：2-3天
傳代周期：3-4天
凍存液配方：細胞完quan培養液+含5%DMSO（v/v）或商品化凍存液

圖2：貼壁生長(cháng)的HEK293T低密度時(shí)的細胞照片（來(lái)自ATCC）

文中部分相關(guān)產(chǎn)品：

HEK293細胞系培養F&Q
1.如果發(fā)生293T細胞不貼壁，漂浮在培養基中的現象，需確認所使用的DMEM中碳酸氫鈉濃度及培養箱中CO2濃度。并參考以下培養體系：
a) DMEM由1.5 g/L碳酸氫鈉配制而成，使用5％CO2培養箱。
b) DMEM由3.7 g/L碳酸氫鈉配制而成，使用10％CO2培養箱。
當使用碳酸氫鹽含量高的培養基時(shí)，必須將這些細胞在10％CO2中孵育，以便正確緩沖培養基。當培養基沒(méi)有適當緩沖時(shí)，239T細胞雖然可以存活，但將無(wú)法粘附并保持漂浮在培養基中。
2.是否需要使用熱滅活胎牛血清？
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養胚胎干細胞、昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。
好啦，工具細胞HEK293和HEK293T的培養攻略就到這里啦，大家想要了解更多細胞培養的小技巧，可以加入我們的細胞一站式互助Club。

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