ATPlite試劑盒的工作原理基于螢火蟲(chóng)熒光素酶(Firefly luciferase)催化的生物發(fā)光反應。在細胞內有活性時(shí),ATP作為細胞代謝的直接能量來(lái)源,其濃度可以反映細胞的增殖狀態(tài)。試劑盒中的螢火蟲(chóng)熒光素酶能夠催化熒光素產(chǎn)生發(fā)光信號,該信號的強度與ATP的濃度成正比。因此,通過(guò)測量發(fā)光信號的強度,可以間接定量測定細胞內的ATP含量,從而評估細胞的活性和增殖狀態(tài)。
ATPlite試劑盒特點(diǎn):
敏感性高:采用優(yōu)化的酶反應體系,使得發(fā)光反應持續數十分鐘,便于手工操作多個(gè)樣品。同時(shí),由于螢火蟲(chóng)熒光素酶對ATP具有很高的親和力,使得試劑盒對ATP的檢測靈敏度高,可達10^-13 mol。
操作簡(jiǎn)便:采用一步法操作,只需將試劑與樣品混合后孵育一段時(shí)間,即可通過(guò)發(fā)光檢測儀讀取結果。無(wú)需復雜的分離步驟,大大簡(jiǎn)化了操作流程。
應用廣泛:適用于各種哺乳動(dòng)物細胞系,包括貼壁細胞和懸浮細胞。同時(shí),由于A(yíng)TP是所有代謝活躍細胞中都存在的分子,因此該試劑盒也可用于其他類(lèi)型細胞的活性檢測。
可用于高通量篩選:操作簡(jiǎn)便、敏感性高,因此非常適用于高通量篩選技術(shù),如藥物篩選、細胞毒性測試等。
ATPlite試劑盒的應用:
細胞增殖評估:通過(guò)測量細胞內ATP含量,可以間接評估細胞的增殖狀態(tài)。在細胞培養過(guò)程中,可以定期使用ATPlite試劑盒檢測細胞內的ATP水平,以了解細胞的生長(cháng)情況。
細胞毒性測試:當細胞受到外界刺激(如藥物、化學(xué)物質(zhì)等)時(shí),其代謝活性會(huì )發(fā)生變化,導致ATP水平下降。因此,可以通過(guò)比較不同條件下細胞內的ATP含量,評估藥物或化學(xué)物質(zhì)的細胞毒性。
藥物篩選:在藥物研發(fā)過(guò)程中,需要篩選具有特定生物活性的化合物??捎糜谠u估候選藥物對細胞活性的影響,為藥物篩選提供重要依據。
ATPlite試劑盒的使用注意事項:
樣品處理:在使用前,需要對樣品進(jìn)行適當的處理,如細胞破碎、離心分離等,以獲取待測樣品中的ATP。
操作條件:反應需要在特定的溫度和時(shí)間下進(jìn)行。請按照說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行操作,以確保結果的準確性。
儲存條件:應儲存于干燥、陰涼處,避免陽(yáng)光直射和潮濕環(huán)境。開(kāi)封后請盡快使用,以免影響效果。